本试剂盒采用改进的 SDS 碱裂解法,结合 DNA 磁珠选择性吸附 DNA 的方法,达到快速纯化质粒 DNA 的目的。适合从 1-4mL 细菌培养物中提取多至 20μg 高纯度的质粒 DNA,用于测序、体外转录与翻译、 限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验。
产品简介
本试剂盒采用改进的 SDS 碱裂解法,结合 DNA 磁珠选择性吸附 DNA 的方法,达到快速纯化质粒 DNA的目的。适合从 1-4mL 细菌培养物中提取多至 20μg 高纯度的质粒 DNA,用于测序、体外转录与翻译、限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验。
Rnase A: 50 mg/mL ,室温保存。
Buffer S1:细菌悬浮液。加入 Rnase A 后,4℃保存。
Buffer S2:细菌裂解液,室温密闭储存。若出现沉淀,应于 37℃温浴溶解并冷却至室温后再使用。
Buffer N3:中和液,室温密闭储存。 Beads: 磁珠溶液,4℃储存。
Elutent:2.5 mM Tris-HCl, pH 8.5,室温密封储存。
操作流程
使用前准备
70% 乙醇
第一次使用前,RNase A 全部加入 Buffer S1 中,4℃储存
准备无核酸和核酸酶污染的 Tip 头等耗材
异丙醇
磁性分离器:可选用海狸磁性分离器,
操作流程
1.第一次使用前,RNase A全部加入Buffer S1中,4℃储存。
2.取1-4mL在LB培养基中培养过夜的菌液(若使用丰富的培养基,菌液体积应减半或更少),12000g离 心1min,弃上清。
3.用100μL已加入RNase A的Buffer S1悬浮细菌沉淀,悬浮需均匀,不应留有小的菌块。
4.加入100 μLBuffer S2,温和并充分地上下翻转混合6-8次,12000g离心10min。
5.吸取125μL步骤4中的离心上清于一新的1.5mL离心管中。
6.加入40 μL beads和60 μL的异丙醇,用枪头吹打3-5次。
表1:转移不同上清液量和对应beads和异丙醇体积用量