DNA文库制备试剂套装 3010 series

酶缓冲溶液亚硫酸氢盐转化法

亚硫酸氢盐序列是检测 DNA 甲基化的一种众所周知的技术，WGBS、RRBS、MeDIP-Seq 和 MSBS 等几种技术被用于全基因组 DNA 甲基化分析。在分子生物学、遗传学和表观遗传学中，DNA 甲基化对细胞发育、分化和基因表达的调控非常重要。大多数甲基化胞嘧啶存在于 CpG 位点，70-80% 的胞嘧啶被甲基化。人类基因组中的 CpG 位点数量约为 2 800 万个，不到基因组的 1%，而预期为 4.4%。 全基因组亚硫酸氢盐测序（WGBS）是最有效的 DNA 甲基化分析方法。唯一的局限是测序成本非常高，因为要对包括所有非甲基化区域在内的整个基因组进行测序。 减少表征亚硫酸氢盐测序（RRBS）是减少表征一小部分甲基化 CpG 位点。RRBS 结合了限制性酶消化和亚硫酸氢盐测序，并对甲基化的 CpG 位点进行富集测序。这是一种在单碱基水平上估算全基因组甲基化模式的有效技术。虽然这可以提高覆盖深度并降低测序成本，但其局限性在于只能覆盖 10%的甲基化 CpG 位点。 甲基化 DNA 免疫沉淀测序（MeDIP-Seq）是另一种用于选择甲基化 DNA 的全基因组富集技术。使用 5-甲基胞嘧啶抗体，通过免疫沉淀从全基因组 DNA 中富集甲基化 DNA。5-甲基胞嘧啶抗体与基因组 DNA 片段孵育并沉淀，然后进行 DNA 纯化和测序。