荧光融合蛋白是研究蛋白质定位和细胞动态的常用工具。这些构建体通常将目标蛋白的全部或至少一个功能域与多种类型的报告荧光蛋白之一融合。二聚体绿色荧光蛋白TurboGFP来源于桡足类Pontellina plumata的绿色荧光蛋白CopGFP(Shagin等人,2004)。它具有明亮的绿色荧光,其激发最大值为482纳米,发射最大值为502纳米。TurboGFP是一种快速成熟的蛋白质--它在细胞内的荧光信号比其他绿色荧光蛋白更早可见。TurboGFP与水母GFP变体只有约20%的序列相同。因此,大多数抗GFP抗体不与TurboGFP结合--包括我们在GFP-Trap中使用的GFP-Nanobody。使用TurboGFP融合蛋白构建体对细胞进行成像是很容易的,尽管为了获得完整的图像,这种成像数据通常与感兴趣的蛋白(或蛋白域)的其他生化信息相结合。
对于这样的生化实验,通常要设计第二个融合蛋白,使用不同的 "标签 "结构域,以便进行纯化。这些额外的体外分析可用于确认 "标签 "融合构建体的功能,以及提取可能在细胞环境中形成的多蛋白复合物。由于缺乏特定的、可靠的和有效的试剂,限制了GFP和相关的荧光融合蛋白在细胞生物学研究和直接生化分析中的应用。
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