DRG C5a ELISA试剂盒是一种基于三明治原理的固相酶联免疫吸附试验(ELISA)。
由于单克隆抗体与补体因子C5的交叉反应,在分析前通过沉淀去除样品中的C5。由此产生的透明上清液含有待测定的C5a(10,11)。在第一次孵化过程中,样品中的C5a与小鼠抗C5a单克隆抗体(mab 561)结合,这些抗体附着在微滴定板的表面。然后通过洗涤除去未结合的成分,在第二个反应中,加入过氧化物酶结合的单克隆抗体(Mab 557),并与C5a上的不同表位结合。通过洗涤除去多余的酶结合抗体;然后测定结合的酶活性。过氧化氢和发色剂之间的酶促反应通过加入稀硫酸终止。
颜色强度与C5a的浓度成正比,用光度法测定。
酶联免疫法,用于定量测量人血浆或尿液中的无精症C5a。补体系统由20多种蛋白质组成,它们作为防御系统演化为对抗入侵的微生物。它也可以在各种疾病状态下或与医疗设备或药物接触时被激活(1)。激活后,一连串的蛋白水解酶会从各自的前体中释放出无色素的C3a、C4a和C5a(2)。这些片段发挥了各种生物功能,如组胺释放、平滑肌收缩、毛细血管通透性增加或免疫调节(3)。
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