酶试剂 N9012

蛋白酶蛋白酶K用于分子生物

蛋白酶 K 是一种内溶性蛋白酶，能切割脂肪族、芳香族或疏水氨基酸羧基上的肽键。蛋白酶 K 被归类为丝氨酸蛋白酶。这种酶水解的最小肽是四肽。 特点 - 即用型溶液 - 重组蛋白酶 K - 在多种反应产物中均有活性 应用 - 从培养细胞和组织中分离基因组 DNA - 从组织或细胞系中分离 DNA 和 RNA 时，去除 DNases 和 RNases - 确定酶的定位 - 提高 PCR 产物的克隆效率 质量控制 DNase 活性：与 λ DNA 在 37ºC 孵育 6 小时后，检测不到酶活性。 RNase 活性：与 RNA 一起在 25ºC 孵育 16 小时后，检测不到核糖核酸酶活性。 来源 来自带有克隆基因的酵母细胞，该基因编码基因工程 Engyodontium album（Tritirachium album）内溶蛋白酶。 分子量 29.3 kDa 单体。 活性单元的定义 以变性血红蛋白为底物，在 37 摄氏度、pH 值为 7.5 的条件下，1 单位的酶可在 1 分钟内释放出相当于 1 µmol 酪氨酸的 Folin 阳性氨基酸和肽。 在以下混合物中检测酶活性： 0.08 M 磷酸二氢钾（pH 7.5）、5 M 尿素、4 mM NaCl、3 mM CaCl2 和 16.7 mg/ml 血红蛋白。 储存缓冲液 酶在以下缓冲液中供应50 mM Tris-HCl（pH 7.5），含 Ca2+ 和甘油作为稳定剂。 抑制和失活 抑制剂：蛋白酶 K 不会被金属螯合剂、硫醇反应试剂或特异性胰蛋白酶和糜蛋白酶抑制剂灭活。