Cas13属于Ⅱ类Ⅵ型CRISPR系统效应蛋白,含有2个高等真核生物和原核生物核苷酸结合(highereukaryotesandprokaryotesnucleotide-binding,HEPN)结合域,随后被证实为是一种RNA靶向剪切的新型蛋白酶。Cas13在向导引导下识别并切割靶标时,其“附属切割”活性被激活,可高效切割体系中非特异单链RNA(ssRNA)。通过设计两端标记荧光基团或者其他标记物的探针,可实现CRISPR/Cas13对模板的检测和信号放大。常用的检测方法包括实时荧光法和胶体金层析法。该系统灵敏度高,特异性强,已经广泛应用于微生物、植物和动物的基因编辑中,并在分子诊断方面具有非常大的实际应用价值。
【备注】
♦ 本产品为重组蛋白
♦ 本产品 1pmol=144 ng
♦ sgRNA 的设计及稳定对反应体系有很大的影响,反应进行前,可通过凝胶电泳检测sgRNA 是否出现降解。
【实验测试】
体系中,加入不同用量的Cas13a 蛋白进行切割ssDNA试验。结果显示,在足量的Cas13a蛋白体系下,10min达到平台期。