体外转录生成的Cas9 mRNA具有帽子和polyA尾巴结构。该mRNA应该与纯的向导RNA一起使用。使用RNA和质粒构建体,可避免启动子-胚胎兼容性问题以及核酸酶和gRNA表达质粒随机整合到宿主动物基因组的可能性。
应用
功能性基因组学/转基因应用
在转基因应用中,建立基因敲除
建立基因敲入动物,将启动子、融合标签或报告基因整合到内源性基因中
特点和优势
RNA可立即用于转基因应用。为了介导DNA位点特异性双链断裂,必须与纯的向导RNA序列一起使用。
组分
每管含25ugμg的Cas9 mRNA。
请注意,该产品不含向导RNA序列。向导RNA必须通过定制CRISPR产品选项卡单独购买。
CRISPR/Cas是细菌和古细菌的一种防御系统,可用来对抗入侵的病毒和质粒。来自酿脓链球菌的II型CRISPR/Cas系统包含两种分子元件,即一个Cas9蛋白和一个非编码向导RNA(gRNA),该系统经过基因改造而被用于真核系统中。Cas9核酸内切酶可在单个gRNA的引导下,在指定基因组位置上引入DNA双链断裂(DSB)。与锌指核酸酶(ZFN)诱导的DSB相似,细胞随后会激活内源性DNA修复程序,即非同源性末端接合(NHEJ)或同源重组修复机制(HDR),对目标DSB进行修复。