支原体检测试剂 MB000-1591

单克隆抗体酶抗生素

支原体（mycoplasma）：又称霉形体，为目前发现的最小的最简单的原核生物，估计有15%~35%的细胞被支原体污染。支原体污染会对细胞造成多方面的影响，包括代谢、免疫或生化特性、生长状况、以及细胞存活等多方面的改变，影响实验结果的稳定性、可靠性和准确性；支原体难以检测，同时也很难消除，其能轻易地通过0.22μm标准滤膜，同时也能拮抗绝大多数的抗生素，给细胞培养造成巨大损失。因此细胞都需要定期（如每2~3个月）进行支原体污染的检测。许多方法可用于检测支原体，包括肉汤或琼脂培养，直接或间接的荧光染色、ELISA、直接或间接的PCR法等，其中，直接PCR法灵敏度高。 为保证PCR结果的准确性，要预防非特异性PCR扩增和污染，常用的措施是采用热启动Taq酶和UDG (尿嘧啶-DNA 糖基化酶)。 化学修饰Taq酶活性中心被封闭，使得该酶在低温或常温没有活性，因此在加样至PCR扩增前，不会产生由于引物错误配对而形成的非特异性扩增。高温(如95℃)条件下，化学修饰基团会水解脱落，释放全部酶活性，从而实现Taq酶的热启动。最大程度降低非特异扩增和引物二聚体的形成，提高扩增灵敏度和特异性。 UDG (尿嘧啶-DNA 糖基化酶)能选择性水解断裂含有dU的单链或双链 DNA中的尿嘧啶糖苷键，形成有缺失碱基的DNA链，在碱性条件及高温下会进一步水解断裂，从而被消除。本产品选择UDG酶，最佳活性温度为50℃，95℃灭活。 本产品含有化学修饰热启动酶的2×PCR mix，配以dUTP和UDG酶，可最大程度降低非特异扩增和引物二聚体的形成，有效防止PCR产物的交叉污染。同时在PCR管中预先加入上样Loading Dye成份，使PCR前加样处理及后续电泳上样变的更方便，以达到准确检测支原体污染，重复性好，可信度高。